Главная

Профиль фосфорилирования миозин-связывающего белка-C медленно регулируется в мышцах с медленным подергиванием в состоянии здоровья и болезни

  1. Внутри- и взаимозависимость фосфорилирования sMyBP-C в мотивах Pro / Ala rich и M Оценить внутризависимость...
  2. Оценка уровней фосфорилирования mSer59, mSer62, mThr84 и mSer204 sMyBP-C в отношении здоровья, усталости и дистрофии
  3. Изучение событий фосфорилирования, присутствующих в отдельных формах sMyBP-C

Внутри- и взаимозависимость фосфорилирования sMyBP-C в мотивах Pro / Ala rich и M

Оценить внутризависимость фосфорилирования в Pro / Ala-богатом мотиве sMyBP-C ( рисунок 1 ), мы выполнили анализы киназы in vitro с использованием ряда фосфоаблированных пептидов вместе с нашей панелью фосфо-специфических антител ( Рис. 2 ). В частности, мы использовали рекомбинантные пептиды дикого типа и фосфоаблированные, соответствующие NH2-концу m-isoform3 (GST-sMyBP-C NH2 aa1-285), поскольку он содержит все известные сайты фосфорилирования, включая mSer-59 и mSer-204. присутствует только в избранных вариантах ( рисунок 1 ). Мы обнаружили, что фосфорилирование mSer59 зависит от фосфорилирования mSer62, но не от mThr84 ( Рис. 3а (дорожка 3), учитывая снижение уровней фосфорилирования на 65% при мутации mSer62 в аланин ( Рис. 3а дорожка 2) по сравнению с контрольным белком дикого типа ( Рис. 3а пер. 1). Аналогично, фосфорилирование mSer62 или mThr84 зависит от фосфорилирования mSer59. Соответственно, мы наблюдали снижение уровня фосфорилирования mSer62 на 50% и 20% ( Рис. 3б , полоса 2) и mThr84 ( Рис. 3с , дорожка 2), соответственно, когда mSer59 мутирует в аланин. Кроме того, мы отмечаем снижение уровня фосфорилирования mSer62 на 30% ( Рис. 3б , полоса 3), когда mThr84 мутирует в аланин. Напротив, замена mSer62 аланином не влияла на уровни фосфорилирования mThr84 ( Рис. 3с , полоса 3) по сравнению с контрольными уровнями дикого типа ( Рис. 3б, в пер. 1).

Фигура 2: Характеристика четырех фосф-специфичных антител к α-sMyBP-C mSer59P, α-sMyBP-C mSer62P, α-sMyBP-C mThr84P и α-sMyBP-C mSer204P.Фигура 2: Характеристика четырех фосф-специфичных антител к α-sMyBP-C mSer59P, α-sMyBP-C mSer62P, α-sMyBP-C mThr84P и α-sMyBP-C mSer204P

Анализы киназы in vitro использовали для определения специфичности каждого фосфо-антитела. NH2-концы sMyBP-C и NH2-концы fMyBP-C были получены в виде GST-слитых белков и обработаны PKA и / или PKC в зависимости от тестируемого фосфо-антитела. Необработанные и обработанные рекомбинантные белки разделяли с помощью стандартного SDS-PAGE и подвергали зондированию с помощью соответствующего фосфоспецифического антитела к mSer59 ( a ), mSer62 ( b ), mThr84 ( c ) и mSer204 ( d – e ). Примечательно, что ни одно из фосфо-антител не распознало необработанный NH2-конец медленной изоформы или обработанный PKA- или PKC NH2-конец быстрой изоформы или контрольного GST. Следовательно, эти антитела являются специфичными для их соответствующих фосфорилированных остатков, присутствующих в NH2-конце sMyBP-C.

Рисунок 3: Оценка внутри- и взаимозависимых событий фосфорилирования в пределах NH2-конца sMyBP-C.Рисунок 3: Оценка внутри- и взаимозависимых событий фосфорилирования в пределах NH2-конца sMyBP-C

In vitro киназные анализы были использованы для определения внутри- и взаимозависимости событий фосфорилирования sMyBP-C в богатом Pro / Ala мотиве и между богатым Pro / Ala мотивом и M-мотивом. Дикие типы и фосфоаблированные мутантные рекомбинантные белки, содержащие NH2-конец sMyBP-C, соответствующий m-изоформе 3, были получены в виде GST-слитых белков и инкубированы с PKA и / или PKC. Обработанные белки разделяли стандартным SDS-PAGE и подвергали зондированию с помощью соответствующего фосфоспецифического антитела к mSer59 ( a ), mSer62 ( b ), mThr84 ( c ) и mSer204 ( d ).

Далее мы изучили взаимозависимость фосфорилирования между областью, богатой Pro / Ala, и М-мотивом. Фосфорилирование mSer204 в М-мотиве через PKA снижается на 27%, 28% и 15% при mSer59 ( Рис. 3d , верхняя панель, полоса 2), mSer62 ( Рис. 3d , верхняя панель, полоса 3) и mThr84 ( Рис. 3d , верхняя панель, дорожка 4) мутированы в аланин соответственно по сравнению с диким типом ( Рис. 3d , верхняя панель, полоса 1). Точно так же фосфорилирование PKC mSer204 снижается на 15%, 24% и 19%, когда mSer59 ( Рис. 3d , нижняя панель, полоса 2), mSer62 ( Рис. 3d , нижняя панель, полоса 3) и mThr84 ( Рис. 3d дорожка 4 на нижней панели замещена аланином, соответственно, по сравнению с уровнями фосфорилирования дикого типа ( Рис. 3d , нижняя панель, полоса 1). Кроме того, PKA-опосредованное фосфорилирование mSer204 сильно зависит от одновременного фосфорилирования трех (известных) сайтов в богатом Pro / Ala мотиве, учитывая резкое снижение (50%) уровней его фосфорилирования, когда mSer59, mSer62 и mThr84 одновременно мутировал в аланин ( Рис. 3d , верхняя панель, полоса 5). Напротив, PKC-опосредованное фосфорилирование mSer204 не зависит от одновременного фосфорилирования сайтов с богатым мотивом Pro / Ala, поскольку не происходит снижения уровней его фосфорилирования, когда mSer59, mSer62 и mThr84 замещены аланинами ( Рис. 3d , нижняя панель, полоса 5). Таким образом, фосфорилирование PKA и PKC mSer204 в пределах М-мотива дифференциально зависит от индивидуальных и комбинаторных событий фосфорилирования в Pro / Ala-богатом мотиве. Примечательно, что фосфорилирование mSer59, mSer62 или mThr84 в Pro / Ala-обогащенном мотиве не зависит от фосфорилирования mSer204 в М-мотиве ( Рис. 3a – c переулок 4).

Изучение профиля фосфорилирования sMyBP-C в медленно сокращающихся мышцах подошвы на предмет здоровья, усталости и дистрофии

Чтобы изучить профиль фосфорилирования sMyBP-C in vivo , мы выбрали мышечную медленно сокращающуюся подошвенную мышцу в качестве модельной системы из-за обильной экспрессии нескольких вариантов sMyBP-C 8 , 10 , В частности, мы создали лизаты мышц подошвы, полученные от: 1. молодых (~ 2 месяца) и пожилых (~ 14 месяцев) мышей дикого типа, 2. мышей mdx по возрасту (модель дистрофин-дефицитной мышечной дистрофии), и 3. молодые (~ 4 месяца) мыши дикого типа и мышей mdx, подвергнутые протоколу острой усталости in vitro . Лизаты анализировали с помощью стандартного или фосфат-сродственного иммуноблоттинга SDS-PAGE. Учитывая наличие нескольких вариантов sMyBP-C, имеющих одинаковую молекулярную массу (126–131,5 кДа) 10 иммунореактивные полосы, обнаруженные в наших фосфат-аффинных блотах, могут соответствовать различным вариантам, фосфорилированным в разной степени, дифференциально фосфорилированным формам одного и того же варианта или их комбинации. Поэтому мы воздерживаемся от ссылки на них как на гиперфосфорилированные или гипофосфорилированные виды; вместо этого мы называем их видами с низкой, средней или высокой подвижностью.

Сначала мы исследовали общие уровни sMyBP-C с помощью стандартного иммуноблоттинга SDS-PAGE с использованием антитела α-pan-sMyBP-C. Мы обнаружили скромное, но значимое снижение уровней sMyBP-C в пожилом диком типе (~ 15%), но не в утомленной ткани молодого дикого типа, по сравнению с неутомимым молодым диким типом soleus ( Рис. 4а и а ' ). Более того, общие уровни sMyBP-C остаются неизменными в молодых утомленных и неутомленных образцах MDX, но значительно снижаются (~ 20%) в соответствующих старых мышцах MDX ( Рис. 4а и а ' ).

Рисунок 4: Исследование профиля фосфорилирования sMyBP-C в молодых и старых мышцах дикого типа и mdx soleus при отсутствии или наличии усталости.

( а ) Вестерн-блот анализ белковых лизатов, разделенных стандартным SDS-PAGE и приготовленных из шести групп единственных мышц, включая: 1. молодых (~ 2 месяца) дикого типа (n = 7), 2. старых (~ 14 месяцев) диких тип (n = 4), 3. молодой (~ 4 месяца) дикий тип, подверженный утомлению (n = 3), 4. молодой (~ 2 месяца) MDX (n = 4), 5. старый (~ 14 месяцев) MDX (n = 4) и 6. молодые (~ 4 месяца) MDX подвержены усталости (n = 3). Образцы зондировали пан-специфическим антителом, распознающим все варианты sMyBP-C, α-pan-sMyBP-C и α-Hsp90 для обеспечения равной нагрузки. ( a ' ) Расчет процента (%) экспрессии общего sMyBP-C в различных группах мышц подошвы после нормализации к уровням экспрессии Hsp90 относительно процента (%) экспрессии sMyBP-C в молодой ткани дикого типа , который был установлен в качестве базового уровня. Значимость рассчитывали с помощью t-критерия Стьюдента (p <0,01). Символы * и # обозначают статистическую значимость по сравнению с тканью молодого дикого типа и молодой MDX , соответственно. ( c ) Разделение тех же белковых лизатов, которые использовались на панели ( a ), с помощью SDS-PAGE с аффинностью к фосфату с последующим иммунопробированием с антителом α-pan-sMyBP-C. Цветные точки обозначают иммунореактивные полосы низкой (красные и желтые точки), промежуточные (светло-зеленые, темно-зеленые, бирюзовые и темно-синие точки) и высокой (фиолетовые, розовые, светло-розовые, оранжевые и белые точки) подвижности.

Оценка состояния фосфорилирования sMyBP-C в молодых подошвенных мышцах дикого типа с использованием антитела α-pan-sMyBP-C и SDS-PAGE сродства к фосфату показала присутствие девяти различных видов, соответствующих дифференциально фосфорилированным формам вариантов sMyBP-C ( Рис. 4б ). Для простоты изложения мы обозначаем наблюдаемые иммунореактивные полосы цветными точками. Мы обнаружили две полосы низкой подвижности (красные и желтые точки), четыре промежуточные полосы подвижности (светло-зеленые, темно-зеленые, бирюзовые и темно-синие точки) и три полосы высокой подвижности (розовые, светло-розовые и оранжевые точки). В возрасте единственной мышцы дикого типа экспрессировалось одиннадцать различных фосфорилированных видов, разделяющих девять общих видов с молодыми образцами дикого типа и обладающих двумя новыми промежуточными (фиолетовая точка) и высокими (белая точка) формами ( Рис. 4б ). Напротив, утомляемость молодых подошвенных мышц дикого типа значительно изменила картину фосфорилирования sMyBP-C, о чем свидетельствует исчезновение трех промежуточных (бирюзовые, темно-синие и фиолетовые точки) и двух форм высокой (светло-розовые и коричневые точки) подвижности. ( Рис. 4б ).

Аналогичный анализ профиля фосфорилирования sMyBP-C в молодых и старых мышцах mdx soleus показал, что они экспрессируют те же основные виды, что и молодые мышцы soleus дикого типа, за следующими исключениями: как в молодых, так и в старых мышцах mdx soleus содержатся дополнительные виды промежуточной подвижности ( фиолетовая точка), которая также присутствует в выдержанной мышце подошвы дикого типа. Тем не менее, у молодой мышцы MDX soleus отсутствуют два вида с высокой подвижностью (оранжевые и белые точки), в то время как у пожилых mdx soleus мышцы нет одного вида с низкой подвижностью (красная точка) и одного вида с высокой подвижностью (светло-розовая точка) ( Рис. 4б ). Интересно, что профиль фосфорилирования sMyBP-C был значительно изменен в молодых утомленных мышцах mdx soleus по сравнению с неутомленными или утомленными молодыми мышцами mdx soleus дикого типа или без утомления, содержащими только четыре основных вида (обозначены красным, желтым, темно-зеленые и розовые точки) и отсутствие пяти-семи видов средней и высокой подвижности ( Рис. 4б ).

Оценка уровней фосфорилирования mSer59, mSer62, mThr84 и mSer204 sMyBP-C в отношении здоровья, усталости и дистрофии

Используя нашу панель фосфо-специфических антител ( Рис. 2 ) и стандартную SDS-PAGE, мы исследовали уровни фосфорилирования каждого идентифицированного фосфо-сайта в пределах NH2-конца sMyBP-C в мышцах soleus, полученных из шести групп животных, описанных выше. Как и ранее, мы рассматриваем молодые мышцы подошвы дикого типа в качестве основы для качественных и количественных сравнений.

Мы обнаружили, что все шесть образцов содержат варианты sMyBP-C, которые фосфорилированы в mSer59 ( Рис. 5а ). В частности, mSer59 кодируется альтернативно сплайсированным экзоном 5 и включается только в m-изоформу 3, соответствующую NH2-концу человеческих вариантов 1 и 2 ( рисунок 1 ) 11 , Уровни экспрессии вариантов sMyBP-C, фосфорилированных по mSer59, остаются неизменными в старых подошвенных мышцах дикого типа; однако они незначительно, но значительно увеличиваются у молодых утомленных диких типов (~ 8%) и утомленных молодых MDX (~ 4%), в то время как резко снижаются у утомленных молодых MDX (~ 33%) и старых MDX (~ 14%) ) мышцы подошвы, по сравнению с молодыми тканями дикого типа ( Рис. 5а ' ).

Фигура 5: Оценка уровней фосфорилирования mSer59, mSer62, mThr84 и mSer204 sMyBP-C в медленно сокращающихся мышцах подошвы молодых и старых дикого типа и животных mdx в присутствии или отсутствии усталости.

Вестерн-блот-анализ проводили с использованием стандартного SDS-PAGE и лизатов, полученных из шести групп единоличных мышц, описанных в Рис. 4 , Образцы исследовали с помощью антител, распознающих четыре известных фосфо-сайта sMyBP-C, включая α-sMyBP-C mSer59P ( a ), α-sMyBP-C mSer62P ( b ) α-sMyBP-C mThr84P ( c ) и α-sMyBP -C mSer204P ( d ). Уровни каждого фосфорилированного остатка, mSer59 ( a ' ), mSer62 ( b' ), mThr84 ( c ' ) и mSer204 ( d' ) в различных мышцах подошвы, рассчитывали как процент (%) экспрессии по сравнению с таковыми в молодых тканях дикого типа, как описано в Рис. 4 , Значимость рассчитывали с помощью t-критерия Стьюдента (p <0,01). Символы *, # и @ обозначают статистическую значимость по сравнению с тканями молодого дикого типа, молодого mdx и старого дикого типа, соответственно.

Аналогичный анализ белковых лизатов с антителами mSer62P, mThr84P или mSer204P показал наличие белков sMyBP-C, фосфорилированных в соответствующих местах в подошвенных мышцах во всех условиях ( Рис. 5б – г ). Количественный анализ уровней относительной экспрессии фосфо (p) mSer62-содержащих белков sMyBP-C показал, что по сравнению с молодыми тканями дикого типа, старыми дикими типами, молодыми mdx и старыми мышцами mdx soleus наблюдается снижение количества на ~ 39%, ~ 27% и ~ 26% соответственно ( Рис. 5b ' ). Напротив, количество p-mSer62-содержащих белков sMyBP-C остается неизменным в молодых утомленных мышцах дикого типа и mdx soleus по сравнению с молодой необработанной тканью дикого типа ( Рис. 5b ' ). Подобное количественное определение относительного количества p-mThr84-содержащих белков sMyBP-C показало, что они сходны между молодыми дикими типами и старыми дикими типами, молодыми MDX и старыми мышцами MDX soleus ( Рис. 5c ' ). Однако они значительно увеличиваются в утомленных мышцах подошвы дикого типа (~ 25%) и mdx (~ 24%) по сравнению с неутомленными тканями молодого дикого типа ( Рис. 5c ' ). Наконец, относительная количественная оценка p-mSer204-содержащих белков sMyBP-C продемонстрировала, что, хотя утомленные (либо дикого типа или mdx ) и дистрофические mdx (либо молодые, либо старые) мышцы soleus содержат уровни, аналогичные молодым тканям дикого типа, экспрессируется состарившаяся ткань дикого типа снижение (~ 13%) уровня таких видов ( Рис. 5d ' ).

Изучение событий фосфорилирования, присутствующих в отдельных формах sMyBP-C

Используя SDS-PAGE с сродством к фосфату и нашу группу фосфоспецифических антител ( Рис. 2 Затем мы рассмотрели события фосфорилирования, которые присутствуют в отдельных фосфо-видах sMyBP-C, обнаруженных с помощью нашего антитела α-pan-sMyBP-C ( Рис. 4б ). Иммунопробирование белковых лизатов, разделенных с помощью фосфат-сродства SDS-PAGE с антителом mSer59P, выявило присутствие двух основных видов: одного с низкой подвижностью (желтая точка) и одного с высокой подвижностью (розовая точка) эквивалентного содержания в молодой единственной мышце дикого типа ( Рис. 6а ). Они присутствуют в подошвенных мышцах всех исследованных групп, за исключением молодой утомленной ткани MDX , которая выражает только виды с высокой подвижностью ( Рис. 6а ). Интересно, что мышцы подошвы из отдельных групп животных экспрессируют дополнительные формы p-mSer59 sMyBP-C. В частности, состаренная мышца подошвы дикого типа содержит три дополнительных вида, включая одну полосу низкой подвижности (красная точка), одну промежуточную полосу подвижности (фиолетовая точка) и одну полосу высокой подвижности (белая точка) ( Рис. 6а ). Виды с низкой подвижностью, обозначенные красной точкой, также обнаружены в молодых утомленных мышцах подошвы дикого типа ( Рис. 6а ), тогда как вид промежуточной подвижности наблюдается исключительно в возрасте mdx soleus мышцы (темно-зеленая точка) ( Рис. 6а ).

Рисунок 6: Идентификация событий фосфорилирования, присутствующих в отдельных формах sMyBP-C.Рисунок 6: Идентификация событий фосфорилирования, присутствующих в отдельных формах sMyBP-C

Вестерн-блот-анализ с использованием SDS-PAGE-блоттинга сродства к фосфату белковых лизатов, полученных из шести групп мышц soleus, описанных в Рис. 4 были исследованы с четырьмя фосфоспецифическими антителами sMyBP-C: α-sMyBP-C mSer59P ( a ) α-sMyBP-C mSer62P ( b ) α-sMyBP-C mThr84P ( c ) и α-sMyBP-C mSer204P ( d ) , Цветные точки обозначают фосфо-виды sMyBP-C с низкой, средней и высокой подвижностью, идентифицированные с каждым антителом, и соответствуют тем, которые показаны на Рис. 4 ,

Использование антитела mSer62P выявило более сложный профиль. Мы наблюдали пять видов p-mSer62, содержащихся в молодых единичных мышцах дикого типа (красные, желтые, темно-синие, розовые и светло-розовые точки) с различной численностью. Примечательно, что некоторые виды, содержащие p-mSer62, проявляют аналогичную электрофоретическую подвижность с формами, содержащими p-mSer59. Пять p-mSer62-содержащих видов обнаружены в белковых лизатах, полученных из старых мышц дикого типа и молодых mdx soleus, которые также содержат дополнительный вид промежуточной подвижности (фиолетовая точка) ( Рис. 6б ). Напротив, утомленные молодые мышцы дикого типа или mdx и старые мышцы mdx soleus экспрессируют только некоторые из пяти основных фосфо-видов. В частности, утомленные ткани молодого дикого типа или mdx содержат три основные формы, соответствующие двум полосам низкой подвижности (красные и желтые точки) и одной полосе высокой подвижности (розовая точка) ( Рис. 6б ). Напротив, старая мышца mdx soleus выражает одну полосу низкой подвижности (желтая точка), две промежуточные полосы подвижности (темно-синие и фиолетовые точки) и одну полосу высокой подвижности (розовая точка) ( Рис. 6б ).

Аналогичный анализ с использованием антитела mThr84P показал наличие пяти основных видов, содержащих p-mThr84, в молодых точечных мышцах дикого типа (желтые, светло-зеленые, темно-синие, розовые и оранжевые точки), некоторые из которых проявляют аналогичную электрофоретическую подвижность с р- mSer59- и p-mSer62-содержащие формы ( Рис. 6с ). Такая же картина наблюдается в белковых лизатах, полученных из состаренной мышцы подошвы дикого типа, которая, кроме того, выражает виды с более низкой подвижностью (красная точка) ( Рис. 6с ). Исследование молодых и старых мышц mdx soleus показало сходный профиль экспрессии видов, содержащих p-mThr84, по сравнению с молодыми мышцами soleus дикого типа, за исключением того, что в молодой mdx ткани отсутствует вид с высокой подвижностью (оранжевая точка) ( Рис. 6с ). Интересно, что молодые мышцы дикого типа и mdx soleus, подверженные утомлению, экспрессируют только два и один малоподвижный вид, содержащий p-mThr84, соответственно ( Рис. 6с ). Более того, в то время как молодая утомленная мышца дикого типа также содержит полосу высокой подвижности (оранжевая точка), у молодой утомленной ткани MDX отсутствуют формы как средней, так и высокой подвижности ( Рис. 6с ).

Наконец, оценка профиля экспрессии p-mSer204-содержащих вариантов показала наличие четырех основных видов в молодой единственной мышце дикого типа, одного с низкой подвижностью (обозначено желтой точкой) и трех с промежуточной подвижностью (светло-зеленый, темно-зеленый). и бирюзовые точки) ( Рис. 6d ). Изучение количества и относительной численности p-mSer204-содержащих видов в старых подошвенных мышцах дикого типа показало наличие четырех основных видов, обнаруженных в молодых тканях дикого типа, а также дополнительную полосу низкой подвижности (красная точка) ( Рис. 6d ). Три из четырех видов, содержащих p-mSer204, также обнаруживаются после утомления молодых единственных мышц дикого типа ( Рис. 6d ). Примечательно, что относительная численность видов промежуточной подвижности, обозначенных темно-зеленой точкой, резко увеличивается в утомленной ткани молодого дикого типа по сравнению с необработанной мышцей молодого дикого типа ( Рис. 6d ). Подобно молодому дикому типу, молодые и старые мышцы mdx soleus экспрессируют одни и те же четыре вида, содержащие p-mSer204, в то время как молодые утомленные мышцы mdx soleus экспрессируют только одну p-mSer204-содержащую форму промежуточной подвижности (темно-зеленая точка) ( Рис. 6d ).

Похожие

Болезни "написаны" на лице
... впрочем как и мешки под глазами, способны рассказать многое о состоянии нашего здоровья"> Прыщики, впрочем как и мешки под глазами, способны рассказать многое о состоянии нашего здоровья. Но болезнь всегда легче предупредить, чем лечить. Чтобы выяснить, есть ли у вас склонность к тому или иному заболеванию, порой достаточно внимательно посмотреть в зеркало. Обратите внимание: приведенная ниже информация ни в коем случае не может
Зеленый кофе для здоровья и красоты
Большинство из нас, говоря о кофе, имеют в виду черный жареный, гранулированный, молотый или растворимый кофе. Кофейные гурманы предлагают один из этих вариантов, дополняя его различными добавками, такими как молоко, сливки, сироп и сахар. Мало кто знает, что существует более здоровая, более натуральная и не менее вкусная альтернативная форма этого напитка. Это зеленый кофе . Этот кофе сделан из зерен, которые нельзя курить, поэтому его натуральный зеленый цвет. Зеленый
Практикующий здоровье ног
Нет большего удовлетворения, чем забота о других, и наш курс «Практика здоровья ног» дает вам возможность сделать это в своей собственной практике. Нога человека является одной из самых сложных и забытых частей тела. Каждый шаг в 2,5 раза превышает вес нашего тела на 26 костях, составляющих каждую ногу, и было подсчитано, что мы ходим по планете 3 раза за всю жизнь. Нога очень чувствительна, и, как и любая другая часть машины, страдает от износа или повреждения при травме или стрессе, превышающих
Ротару госпитализировали: стало известно о состоянии артистки - новости шоу-бизнеса
В понедельник, 27 августа, певица и народная артистка Украины София Ротару, здоровье которой внезапно ухудшилось , Покинула больницу в Уфе, где пробыла около двух суток. Утром в клинике собрался врачебный консилиум, на котором врачи решали, оставить звезду под наблюдением еще на несколько дней или выписать, передает "
Прерванный половой акт - угроза для интимного здоровья или нет?
... именно так расшифровывается эта аббревиатура) среди других контрацептивов можно охарактеризовать как «дешево и сердито». Для многих родителей, озабоченных работой, бытом и воспитанием ребенка, это шанс сэкономить время на поход в аптеку за презервативами, не тратить деньги на дорогу спираль и не мучиться, высчитывая дни, в которые необходимо обязательно пить противозачаточные таблетки. Однако не все так просто. Давайте обсудим, чем вреден ПСА. Читай также:
Кир начинается, как обычная простуда: врачи рассказали о симптомах опасной болезни
... вирусное заболевание, является одной из основных причин детской смертности в мире / topsante.com Сейчас в Украине наблюдаем очередной эпидемический подъем заболеваемости корью, который связан с низким охватом профилактическими прививками детей и с цикличностью этого заболевания.
Оказание экстренной медицинской помощи является архиважным для спасения жизни пострадавших и больных, снижение ...
Оказание экстренной медицинской помощи является архиважным для спасения жизни пострадавших и больных, снижение их инвалидизации. Качество, объемы, своевременность ее предоставления зависит, безусловно, от подготовки медицинских работников, а также от оснащения необходимой медицинской аппаратурой, инструментарием и медикаментами, без которых оказания медицинской помощи при неотложных состояниях проблематично, а иногда невозможно. Известно, что среди всех умерших от травм, отравлений, ожогов
Минеральная вода - напиток для здоровья! А что?
Знаете ли вы, что в воде есть неровная вода, а правила маркировки минеральной воды изменились? Знаете ли вы, что вы пьете, выпивая минеральную, родниковую или столовую воду? Содержание Одна из самых важных вещей, которые мы должны помнить в жаркую погоду, это орошение. Обычно мы пьем воду для этой цели. И это правильно, потому что вода прекрасно увлажняет
Синдром хронической усталости
Синдром хронической усталости поражает растущую группу людей. ЗПЗ характеризуется глубокой усталостью, отсутствием энергии или даже истощением. Могут возникнуть когнитивные расстройства (так называемая умственная усталость), проблемы со сном, вегетативные расстройства, боль и другие симптомы, которые усугубляются
Инструкции по здоровью и безопасности
... и завода зависит от специфики работы, однако, OHS и инструкции по пожарной безопасности являются обязательным оборудованием, поскольку они влияют на безопасность. Именно поэтому в предложении нашего магазина dozownik-suszarki.pl вы найдете товары высочайшего качества. Они устойчивы к повреждениям, а также переменным погодным условиям, а также очень ясны. Продукты добавлены для сравнения Сравнить выбранные товары Инструкции по
Боль в ногах - причины и лечение - Kosmetologa.pl
... вязана с тривиальной причиной, такой как ношение неудобной обуви. Однако бывает, что они принимают хроническую форму и могут быть симптомом серьезных заболеваний. В обеих ситуациях нельзя недооценивать боль и реагировать на нее как можно скорее. Задачи

Комментарии

Насколько это регулируется?
Насколько это регулируется? Предполагая, что устройство MAD, скорость регулировки важна; некоторые модели могут быть отрегулированы на один миллиметр или одну шестнадцатую дюйма (1/16 ″), в то время как другие не предлагают такой уровень специфичности. Кроме того, некоторые модели оснащены калибраторами, которые отображают текущие настройки и могут быть сброшены до исходных настроек, если требуется перенастройка. Сколько стоит устройство? Многие мундштуки
Каковы причины хронической усталости?
Каковы причины хронической усталости? Все больше людей страдают от хронической усталости из-за многих факторов. Важную роль играют факторы окружающей среды, то есть все более загрязненный воздух, нездоровая пища, психосоциальные факторы (стресс, конфликты) и отсутствие регенерации организма. Однако причины синдрома хронической усталости также могут
Каковы же эти ингредиенты и как они важны для здоровья?
Каковы же эти ингредиенты и как они важны для здоровья? Самыми ценными для здоровья, безусловно, являются высоко минерализованные воды , которые могут обогатить наш рацион значительным количеством отдельных минералов, таких как кальций, магний, йод и фтор . Такая вода на этикетке может иметь надпись: «содержит магний», «содержит бикарбонаты»

А что?
Знаете ли вы, что в воде есть неровная вода, а правила маркировки минеральной воды изменились?
Знаете ли вы, что вы пьете, выпивая минеральную, родниковую или столовую воду?
Насколько это регулируется?
Сколько стоит устройство?
Каковы причины хронической усталости?
Каковы же эти ингредиенты и как они важны для здоровья?
Новости

Rambler's Top100 Рейтинг@Mail.ru